بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپa در e. coli از یک ژن مصنوعی

Authors

فیروز ابراهیمی

علیرضا فراست

سید جعفر موسوی

سامان حسینخانی

عباس حاجی زاده

abstract

نوروتوکسین های بوتولینوم، سمی ترین ترکیبات بیولوژیک شناخته­­ شده اند که باعث ایجاد فلج عضلانی می­شوند. خاصیت آنزیمی این توکسین ها، مهار آزاد­سازی میانجی عصبی استیل کولین را باعث می­شود. مطالعه حاضر با هدف تولید نوترکیب بخش کاتالیتیک (زنجیره سبک) سم بوتولینوم تیپ a با درصد خلوص بالا، به منظور ارزیابی فعالیت آنزیمی انجام شد.  توالی ژن زنجیره کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a از پایگاه ژنی ncbi گرفته شد. پس از بهینه سازی کدون ترجیحی ژن مورد نظر برای e.­coli، توالی نهایی ژن به منظور سنتز در وکتور بیانی pet28a(+) سفارش داده شد. پس از انتقال وکتور بیانی نوترکیب دارای ژن مذکور به میزبان e.­coli bl21-de3 ، فرایند بیان در شرایط استاندارد انجام شد. در ادامه تولید پروتئین مورد نظر به شکل محلول با بهینه سازی کشت میزبان و بیان پروتئین صورت پذیرفت. پروتئین بیانی به وسیله ستون ni-nta تخلیصو با آنتی بادی اختصاصی مورد تأیید قرار گرفت. در این تحقیق بالاترین میزان بیان به شکل محلول، در شرایط غلظت 5/0 میلی مولار iptg، با جذب نوری 5/0 و زمان القای 18 ساعت در دمای 18 درجه سانتی گراد به دست آمد. آزمایش های وسترن بلات و الایزا، وجود پروتئین هدف را تأیید کردند.براساس نتایج، زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a به شکل محلول تولید شد. فرایند تخلیص نیز با رزین تمایلی با کیفیت عالی انجام شد به طوری که پروتئین مورد نظر با درصد خلوص 98 به دست آمد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

همسانه‌سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع B باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری E. coli

   Backgrounds & Aims: Botulism is caused by botulinum toxin. The best way to avoid the neurotoxin syndrome caused by BONT/B is to use recombinant vaccine made of BONT/B binding domain because binding domain has sufficient epitops to stimulate immune response. Materials & Methods: Initially BONT/B binding domain gene sequence were obtained from GenBank. Then the primers were designed. PCR react...

full text

بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب انتهای کربوکسیل نوروتوکسین بوتولینوم A در باکتری اشریشیاکلی به عنوان کاندیدای تولید واکسن بوتولیسم

چکیده زمینه و هدف: بوتولیسم بیماری کشنده‌ای است که توسط نوروتوکسین یکی از هفت نوع کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. بخش کربوکسیل زنجیره سنگین نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A(BoNT/A-Hc)، از قابلیت بالایی در تحریک سیستم ایمنی برخوردار است که امروزه برای تولید واکسن نوترکیب علیه بوتولیسم به کار می‌رود. هدف از این پژوهش بیان و تخلیص فرم محلول این بخش از نوروتوکسین در باکتری اشریشیاکلی نوترک...

full text

بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب ژن سنتتیک زنجیره HC تتانوتوکسین در سیستم بیانی پروکاریوت

زمینه و هدف: توکسین کلستریدیوم تتانی یا تتانواسپاسمین عامل بیماری مهلک کزاز است. امروزه از توکسوئید آن به عنوان واکسن استفاده می شود. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره L، HN و HC می باشد. زنجیره HC بخش اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندیدای واکسن مطرح می باشد. هدف از این مطالعه، طراحی و تهیه ژن صناعی زنجیره HC تتانواسپاسمین، بیان و بهینه سازی آن و تخلیص پروتئین نوترکیب حاصل از آن به عنو...

full text

بررسی ایمنی‌زایی نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصال‌دهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در موش

Abstract Background and purpose: Clostridium botulinum neurotoxins are the most potent toxins that cause the life-threatening botulism syndrome in humans and animals. Researches have shown that the binding domain of the botulinum neurotoxin type E has a high immunogenicity effect that could be used as an efficient recombinant vaccine. The recombinant vaccines are not potent enough to stimulate...

full text

ارزیابی بیان نوترکیب زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ ‌A‌ متصل به یک پپتید ‌ نفوذ کننده به سلول ‌

سابقه و هدف: توکسین بوتولینوم تیپ A امروزه به طور گسترده ای به صورت تزریقی در درمان برخی اختلالات انقباضی ماهیچه‌هابه کار می رود.این مطالعه به منظور تولیدپروتئین نوترکیب حاصل از اتصال کوالان زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) به پپتید TAT(47-57)وهمچنین شرایط مناسببرای افزایشبیان و تخلیص این پروتئین انجام شد. مواد و روش­ ها:در این مطالعه بنیادی توالی نوکلئوتیدی زنجیره سبک توکسین بوتولینو...

full text

بیان آنتی بادی زنجیره سنگین شتری(نانوبادی)علیه نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در pichia pastoris

چکیده مخمر پیکیا پاستوریس یک میزبان برجسته برای تولید پروتئین های نوترکیب است و در مقایسه با دیگر سیستم های بیانی مزایای فراوانی دارد. از جمله اینکه این سیستم به عنوان یک یوکاریوت، قادر است تعداد زیادی از تغییرات پس از ترجمه همچون پردازش پروتئولتیک، فولدینگ صحیح، تشکیل پیوند های دی سولفیدی و گلیکوزیلاسیون پروتئین ها را انجام دهد. همچنین قادر به استفاده از متانول به عنوان تنها منبع کربن در غیاب...

15 صفحه اول

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
زیست فناوری دانشگاه تربیت مدرس

Publisher: دانشگاه تربیت مدرس

ISSN

volume 3

issue 2 2013

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023